GLPBIO GK10001-10 Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 2 x 5mL
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품질관리
Related Biological Data | Related Biological Data | Related Biological Data |
 |  |  |
Protocol
세포 수 측정
1. 96구 웰 플레이트에 세포 수용액을 각 웰에 100 μL씩 접종하세요. 웰에 거품이 들어가지 않도록 주의하여 플레이트를 습윤한 부화기에 놓아주세요. (예: 37°C, 5% 이산화탄소 환경)
2. 플레이트 각 웰에 CCK8 용액 10 μL을 첨가하세요. 웰에 거품이 생기지 않도록 주의하세요. 거품은 흡광도 측정에 방해됩니다.
3. 플레이트를 부화기에서 1 - 4시간 동안 부화하세요.
4. 마이크로플레이트 리더를 사용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하세요.
세포 증식 및 세포 독성 분석
1. 96구 웰 플레이트에 103-104 세포/well 밀도로 세포를 시약하는데 사용할 배양 매질 100 μL에 시약하세요. 세포는 37°C의 이산화탄소 부화기에서 24시간 동안 배양합니다.
2. 플레이트에 다양한 농도의 물질을 첨가하세요.
3. 플레이트를 부화기에서 적절한 시간 동안 (예: 6, 12, 24 또는 48 시간) 부화하세요.
4. 반복 피펫을 사용하여 플레이트의 각 웰에 CCK8 용액 10 μL을 첨가하세요. 웰에 거품이 생기지 않도록 주의하세요.
5. 플레이트를 부화기에서 1 - 4시간 동안 부화하세요.
6. 플레이트를 읽기 전에 1분 동안 균질한 색상 분포를 확보하기 위해 교란 쉐이커에서 부드럽게 혼합하세요.
7. 마이크로플레이트 리더를 사용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하세요.
데이터 분석
통계 분석은 여러 가지 방법이 있습니다. O.D. 값 또는 세포 수를 사용할 수 있습니다. 우리는 그 중 하나를 제공합니다.
세포 생존율 (%) = [(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100
억제율 (%) = [(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100
As = 실험 웰의 흡광도 (세포, 매질, CCK8 및 시험 물질의 웰 흡광도).
Ab = 빈 웰 흡광도 (매질과 CCK8이 있는 웰의 흡광도).
Ac = 통제 웰 흡광도 (세포, 매질 및 CCK8이 있는 웰의 흡광도).
표준곡선 작성
1. 세포 계수 플레이트로 세포 수용액 내의 세포 수를 계수합니다.
2. 배지를 사용하여 세포 수용액을 농도 그래디언트로 희석하세요. 보통 5-7개의 농도 그래디언트, 각 그룹당 몇 개의 복제 웰이 필요합니다. 그런 다음 세포를 시약하세요.
(각 웰에 들어가는 세포 수를 기록하세요. 세포 수용액을 튜브에서 희석하는 경우 웰에 추가하기 전에 세포를 신중하게 혼합하세요. 각 웰의 세포 수용액의 양은 동일해야 합니다.)
3. 세포가 부착될 때까지 배양하세요 (일반적으로 2-4시간). 그런 다음 배지 100 μL 당 CCK8 10 μL을 추가하세요. 부화를 1-4시간 동안 계속하고 마이크로플레이트 리더로 450 nm에서 흡광도를 측정하세요.
세포 수를 X축 좌표로, O.D. 값을 Y축 좌표로 사용하여 표준곡선을 작성하세요. 표본의 세포 수는 이 곡선을 기반으로 결정할 수 있습니다. 이 표준곡선을 사용하기 위한 전제 조건은 배양 조건이 동일해야 합니다.
주의 사항
1. 약물과 CCK8이 배지 내에서 고르게 분산되었는지 확인하세요.
2. 세포가 더 많이 증식할수록 색상이 진해지며, 세포 독성이 강해질수록 색상이 연해집니다.
3. 부착 세포의 경우 웰당 최소 1000개의 세포 (100 μl 매질)가 필요합니다. 백혈구의 경우 민감도가 낮기 때문에 웰당 최소 2500개의 세포 (100 μl 매질)가 필요합니다.
권장되는 96구 웰 플레이트의 웰 당 최대 세포 수는 25,000개입니다. 24구 웰 또는 6구 웰 플레이트를 사용하는 경우 웰 당 세포 수를 계산하고 CCK8 용량을 웰 당 총 액체 용량의 10%로 조정하세요.
4. CCK8 분석은 생존 세포의 탈수소효소 활성을 기반으로 합니다. 탈수소효소 활성에 영향을 주는 조건이나 화학 물질은 실제 생존 세포 수와 CCK8을 사용한 생존 세포 수 간의 차이를 일으킬 수 있습니다.
5. WST-8은 환원제와 반응하여 WST-8 포르마잔을 생성할 수 있습니다. 환원제(예: 일부 항산화제)가 사용된 경우 시험에 방해가 될 수 있습니다. 시험 대상 시스템에서 더 많은 환원제가 존재하는 경우 제거해야 합니다.
6. 2시간의 부화 후 배경 O.D. 값은 일반적으로 0.1-0.2 단위입니다.
7. 웰에 공기 거품이 들어가지 않도록 주의하세요. 공기 거품은 O.D. 값을 방해할 수 있습니다.
8. CCK8 용액을 멸균하려면 0.2 μm 막 필터 용액을 사용하세요.
9. 부화 시간은 웰 내의 세포 종류와 양에 따라 다를 수 있습니다. 일반적으로 백혈구는 색상이 연해 부화 시간이 더 길어질 수 있습니다 (최대 4시간) 또는 많은 세포 수 (~105 세포/웰)가 필요할 수 있습니다.
10. 세포 이광 스스로가 있는 경우, 600 nm 이상에서 샘플의 O.D 값 측정 및 차감하세요.
11. CCK8은 세포 염색에 사용할 수 없습니다.
12. 배지 내의 페놀 레드는 실험 결과에 영향을 미치지 않습니다. 페놀 레드의 흡광도는 계산 시 빈 웰의 배경 흡광도를 차감하여 제거할 수 있습니다.
13. CCK8의 독성은 매우 낮습니다. CCK8 분석 후, 동일한 세포는 크리스탈 바이올렛 분석, 뉴트럴 레드 분석 또는 DNA 형광 분석과 같은 기타 세포 증식 분석에 사용할 수 있습니다.
(세포가 극히 드문 경우를 제외하고는 권장하지 않습니다.)
14. 이 키트는 대장균에서 사용 가능하지만 효모 세포에서는 사용할 수 없습니다.
15. 플레이트를 읽기 전에 쉐이커에서 부드럽게 혼합하세요.
16. 웰의 중심에 세포를 접종하는 것을 권장합니다. 가장 바깥쪽 원의 웰의 배지가 증발하기 쉽기 때문에 PBS, 물 또는 배지로 채울 수 있습니다.
17. 450 nm 필터가 없는 경우, 430~490 nm 흡광도 범위의 필터 또는 최적 감도를 위해 450 nm 필터를 사용할 수 있습니다.
18. 450 nm에서 흡광도를 측정하세요. 듀얼 파장 측정이 필요한 경우, 참조 파장으로 650 nm의 흡광도를 결정할 수 있습니다.
19. 약물에 금속 이온이 함유되어 있으면 CCK8 감도에 영향을 줄 수 있습니다. 1 mM 농도에서 납 염화물, 철 염화물 및 구리 황산염이 색 반응의 5%, 15% 및 90%를 억제하며 감도가 감소합니다.
최종 농도가 10 mM인 경우, 억제율은 100%가 됩니다.
배경
세포 계수 키트-8 (CCK-8)는 WST-8 (2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, monosodium salt)을 사용하여 간편한 분석을 가능하게 합니다. 이것은 전자 캐리어 1-Methoxy PMS의 존재에서 생물 환원에 의해 수용성 포마잔 염료를 생성합니다. CCK-8 용액은 세포에 직접 첨가되며 구성 요소 사전 혼합이 필요하지 않습니다. WST-8은 세포 탈수소화 효소에 의해 바이오환원되어 조직 배양 매체에서 용해 가능한 주황색 포마잔 생성물로 변합니다. 생성된 포마잔 양은 생존하는 세포 수와 직접 비례합니다. CCK-8 용액은 매우 안정적이고 세포 독성이 거의 없기 때문에 24~48시간과 같이 더 긴 배양 기간도 가능합니다. 세포 계수 키트 - 8은 증식 및 세포 독성 실험에서 생존하는 세포의 수를 결정하기 위한 민감한 색채 메트릭 분석을 가능하게 합니다. 검출 감도는 MTT, XTT 또는 MTS와 같은 다른 테트라졸리움 염보다 높습니다.
그림 1. Cell Conting Kit-8 (CCK-8)의 작동 매커니즘.
기능 및 속성
| 바름 | 1) 세포 증식 결정 - GlpBio Cell Counting Kit-8 (CCK-8)는 물에 녹는 특성을 가지며 배양 과정에서 안정적이며 비독성입니다. 2) 세포 생존도 평가 - 대사 활동 및 염료 생성은 생존도 변화에 비례하여 변화합니다. 사이토카인 분석 - 사이토카인 유발 증식을 측정합니다. 연구 종료 후에 원하는 경우 세포를 회수하고 확장할 수 있습니다. 3) 세포 독성 분석 - 세포 독성 화학 물질로 인한 세포 사멸은 색상 발현에 영향을 미치지 않으며, 생존 세포만이 시약을 색상 측정 지시체로 변환시킵니다. 시약 자체는 무해도가 거의 없으며, 일반적으로 세포에 안전합니다. |
| 배송 | Ship with blue ice. |
| 보관 조건 | 4°C에서 빛을 피해 저장하면 최대 12개월 동안 안정합니다. -20°C에서 빛을 피해 저장하면 최대 2년 동안 안정합니다. |
| 용법 | 연구 전용! 사람에게 사용하지 마십시오. |
장점
Comparison of Different Methods to Measure Cell Viability
| CCK-8 | MTT | MTS | SRB |
| Solubility | Water soluble | Indissolvable | Water soluble | Indissolvable |
| Detection Wavelength | 450nm | 490nm | 450nm | 510nm |
| Character | Liquid | Solid | Liquid | Liquid |
| Usage | No need to prepare | Prepare the solutions | Use it right after it was ready | Prepared beforehand |
| Need to redissolve or not | NO | Yes,by DMSO | No | Yes,by Tris-base solution |
| Convenience | +++ | ++ | +++ | + |
| Detection speed | +++ | + | ++ | + |
| Repeatability | +++ | + | ++ | ++ |
| Stability | ++ | + | + | +++ |
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8) 반품기간(10일) 경과 후 파손된 상품에 대해 교환이나 환불이 불가능합니다.
제품 A/S
장비의 고장이나 불량이 의심 될 경우 고객센터 031-790-4624 로 사전 문의 후 A/S가 가능합니다.
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품질관리
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세포 수 측정
1. 96구 웰 플레이트에 세포 수용액을 각 웰에 100 μL씩 접종하세요. 웰에 거품이 들어가지 않도록 주의하여 플레이트를 습윤한 부화기에 놓아주세요. (예: 37°C, 5% 이산화탄소 환경)
2. 플레이트 각 웰에 CCK8 용액 10 μL을 첨가하세요. 웰에 거품이 생기지 않도록 주의하세요. 거품은 흡광도 측정에 방해됩니다.
3. 플레이트를 부화기에서 1 - 4시간 동안 부화하세요.
4. 마이크로플레이트 리더를 사용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하세요.
세포 증식 및 세포 독성 분석
1. 96구 웰 플레이트에 103-104 세포/well 밀도로 세포를 시약하는데 사용할 배양 매질 100 μL에 시약하세요. 세포는 37°C의 이산화탄소 부화기에서 24시간 동안 배양합니다.
2. 플레이트에 다양한 농도의 물질을 첨가하세요.
3. 플레이트를 부화기에서 적절한 시간 동안 (예: 6, 12, 24 또는 48 시간) 부화하세요.
4. 반복 피펫을 사용하여 플레이트의 각 웰에 CCK8 용액 10 μL을 첨가하세요. 웰에 거품이 생기지 않도록 주의하세요.
5. 플레이트를 부화기에서 1 - 4시간 동안 부화하세요.
6. 플레이트를 읽기 전에 1분 동안 균질한 색상 분포를 확보하기 위해 교란 쉐이커에서 부드럽게 혼합하세요.
7. 마이크로플레이트 리더를 사용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하세요.
데이터 분석
통계 분석은 여러 가지 방법이 있습니다. O.D. 값 또는 세포 수를 사용할 수 있습니다. 우리는 그 중 하나를 제공합니다.
세포 생존율 (%) = [(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100
억제율 (%) = [(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100
As = 실험 웰의 흡광도 (세포, 매질, CCK8 및 시험 물질의 웰 흡광도).
Ab = 빈 웰 흡광도 (매질과 CCK8이 있는 웰의 흡광도).
Ac = 통제 웰 흡광도 (세포, 매질 및 CCK8이 있는 웰의 흡광도).
표준곡선 작성
1. 세포 계수 플레이트로 세포 수용액 내의 세포 수를 계수합니다.
2. 배지를 사용하여 세포 수용액을 농도 그래디언트로 희석하세요. 보통 5-7개의 농도 그래디언트, 각 그룹당 몇 개의 복제 웰이 필요합니다. 그런 다음 세포를 시약하세요.
(각 웰에 들어가는 세포 수를 기록하세요. 세포 수용액을 튜브에서 희석하는 경우 웰에 추가하기 전에 세포를 신중하게 혼합하세요. 각 웰의 세포 수용액의 양은 동일해야 합니다.)
3. 세포가 부착될 때까지 배양하세요 (일반적으로 2-4시간). 그런 다음 배지 100 μL 당 CCK8 10 μL을 추가하세요. 부화를 1-4시간 동안 계속하고 마이크로플레이트 리더로 450 nm에서 흡광도를 측정하세요.
세포 수를 X축 좌표로, O.D. 값을 Y축 좌표로 사용하여 표준곡선을 작성하세요. 표본의 세포 수는 이 곡선을 기반으로 결정할 수 있습니다. 이 표준곡선을 사용하기 위한 전제 조건은 배양 조건이 동일해야 합니다.
주의 사항
1. 약물과 CCK8이 배지 내에서 고르게 분산되었는지 확인하세요.
2. 세포가 더 많이 증식할수록 색상이 진해지며, 세포 독성이 강해질수록 색상이 연해집니다.
3. 부착 세포의 경우 웰당 최소 1000개의 세포 (100 μl 매질)가 필요합니다. 백혈구의 경우 민감도가 낮기 때문에 웰당 최소 2500개의 세포 (100 μl 매질)가 필요합니다.
권장되는 96구 웰 플레이트의 웰 당 최대 세포 수는 25,000개입니다. 24구 웰 또는 6구 웰 플레이트를 사용하는 경우 웰 당 세포 수를 계산하고 CCK8 용량을 웰 당 총 액체 용량의 10%로 조정하세요.
4. CCK8 분석은 생존 세포의 탈수소효소 활성을 기반으로 합니다. 탈수소효소 활성에 영향을 주는 조건이나 화학 물질은 실제 생존 세포 수와 CCK8을 사용한 생존 세포 수 간의 차이를 일으킬 수 있습니다.
5. WST-8은 환원제와 반응하여 WST-8 포르마잔을 생성할 수 있습니다. 환원제(예: 일부 항산화제)가 사용된 경우 시험에 방해가 될 수 있습니다. 시험 대상 시스템에서 더 많은 환원제가 존재하는 경우 제거해야 합니다.
6. 2시간의 부화 후 배경 O.D. 값은 일반적으로 0.1-0.2 단위입니다.
7. 웰에 공기 거품이 들어가지 않도록 주의하세요. 공기 거품은 O.D. 값을 방해할 수 있습니다.
8. CCK8 용액을 멸균하려면 0.2 μm 막 필터 용액을 사용하세요.
9. 부화 시간은 웰 내의 세포 종류와 양에 따라 다를 수 있습니다. 일반적으로 백혈구는 색상이 연해 부화 시간이 더 길어질 수 있습니다 (최대 4시간) 또는 많은 세포 수 (~105 세포/웰)가 필요할 수 있습니다.
10. 세포 이광 스스로가 있는 경우, 600 nm 이상에서 샘플의 O.D 값 측정 및 차감하세요.
11. CCK8은 세포 염색에 사용할 수 없습니다.
12. 배지 내의 페놀 레드는 실험 결과에 영향을 미치지 않습니다. 페놀 레드의 흡광도는 계산 시 빈 웰의 배경 흡광도를 차감하여 제거할 수 있습니다.
13. CCK8의 독성은 매우 낮습니다. CCK8 분석 후, 동일한 세포는 크리스탈 바이올렛 분석, 뉴트럴 레드 분석 또는 DNA 형광 분석과 같은 기타 세포 증식 분석에 사용할 수 있습니다.
(세포가 극히 드문 경우를 제외하고는 권장하지 않습니다.)
14. 이 키트는 대장균에서 사용 가능하지만 효모 세포에서는 사용할 수 없습니다.
15. 플레이트를 읽기 전에 쉐이커에서 부드럽게 혼합하세요.
16. 웰의 중심에 세포를 접종하는 것을 권장합니다. 가장 바깥쪽 원의 웰의 배지가 증발하기 쉽기 때문에 PBS, 물 또는 배지로 채울 수 있습니다.
17. 450 nm 필터가 없는 경우, 430~490 nm 흡광도 범위의 필터 또는 최적 감도를 위해 450 nm 필터를 사용할 수 있습니다.
18. 450 nm에서 흡광도를 측정하세요. 듀얼 파장 측정이 필요한 경우, 참조 파장으로 650 nm의 흡광도를 결정할 수 있습니다.
19. 약물에 금속 이온이 함유되어 있으면 CCK8 감도에 영향을 줄 수 있습니다. 1 mM 농도에서 납 염화물, 철 염화물 및 구리 황산염이 색 반응의 5%, 15% 및 90%를 억제하며 감도가 감소합니다.
최종 농도가 10 mM인 경우, 억제율은 100%가 됩니다.
배경
세포 계수 키트-8 (CCK-8)는 WST-8 (2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, monosodium salt)을 사용하여 간편한 분석을 가능하게 합니다. 이것은 전자 캐리어 1-Methoxy PMS의 존재에서 생물 환원에 의해 수용성 포마잔 염료를 생성합니다. CCK-8 용액은 세포에 직접 첨가되며 구성 요소 사전 혼합이 필요하지 않습니다. WST-8은 세포 탈수소화 효소에 의해 바이오환원되어 조직 배양 매체에서 용해 가능한 주황색 포마잔 생성물로 변합니다. 생성된 포마잔 양은 생존하는 세포 수와 직접 비례합니다. CCK-8 용액은 매우 안정적이고 세포 독성이 거의 없기 때문에 24~48시간과 같이 더 긴 배양 기간도 가능합니다. 세포 계수 키트 - 8은 증식 및 세포 독성 실험에서 생존하는 세포의 수를 결정하기 위한 민감한 색채 메트릭 분석을 가능하게 합니다. 검출 감도는 MTT, XTT 또는 MTS와 같은 다른 테트라졸리움 염보다 높습니다.
그림 1. Cell Conting Kit-8 (CCK-8)의 작동 매커니즘.
기능 및 속성
| 바름 | 1) 세포 증식 결정 - GlpBio Cell Counting Kit-8 (CCK-8)는 물에 녹는 특성을 가지며 배양 과정에서 안정적이며 비독성입니다. 2) 세포 생존도 평가 - 대사 활동 및 염료 생성은 생존도 변화에 비례하여 변화합니다. 사이토카인 분석 - 사이토카인 유발 증식을 측정합니다. 연구 종료 후에 원하는 경우 세포를 회수하고 확장할 수 있습니다. 3) 세포 독성 분석 - 세포 독성 화학 물질로 인한 세포 사멸은 색상 발현에 영향을 미치지 않으며, 생존 세포만이 시약을 색상 측정 지시체로 변환시킵니다. 시약 자체는 무해도가 거의 없으며, 일반적으로 세포에 안전합니다. |
| 배송 | Ship with blue ice. |
| 보관 조건 | 4°C에서 빛을 피해 저장하면 최대 12개월 동안 안정합니다. -20°C에서 빛을 피해 저장하면 최대 2년 동안 안정합니다. |
| 용법 | 연구 전용! 사람에게 사용하지 마십시오. |
장점
Comparison of Different Methods to Measure Cell Viability
| CCK-8 | MTT | MTS | SRB |
| Solubility | Water soluble | Indissolvable | Water soluble | Indissolvable |
| Detection Wavelength | 450nm | 490nm | 450nm | 510nm |
| Character | Liquid | Solid | Liquid | Liquid |
| Usage | No need to prepare | Prepare the solutions | Use it right after it was ready | Prepared beforehand |
| Need to redissolve or not | NO | Yes,by DMSO | No | Yes,by Tris-base solution |
| Convenience | +++ | ++ | +++ | + |
| Detection speed | +++ | + | ++ | + |
| Repeatability | +++ | + | ++ | ++ |
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3) 해외 발주 상품의 경우
4) 포장을 개봉하였거나 포장 및 제품이 훼손되어 상품가치가 현저히 상실되고 재판매가 불가능한 경우
5) 구매자의 책임 있는 사유로 상품 등이 멸실 또는 훼손된 경우
6) 고객의 주문에 의해 제작되는 주문제작의 경우
7) 반품으로 배송되는 과정 중 파손된 경우 (택배사의 주의 혹은 부실포장으로 인한 파손이므로 반품불가)
8) 반품기간(10일) 경과 후 파손된 상품에 대해 교환이나 환불이 불가능합니다.
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